.RU

Общая хирургия практические занятия Харьков 2010 Учебное пособие (Общая хирургия: практические занятия) предназначено для студентов III-VI курсов высших медицинских учебных заведений III-IV уровня аккредитации и врачей-интернов - 21

^

5.3Методика определения групп крови АВ0

5.3.1Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам


Этот способ в настоящее время наиболее распространен в клинической и лабораторной практике.
Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинация. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25єС.
^ Необходимое оснащение
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (Ш) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 °С (в холодильнике). Срок годности сыворотки указан на этикетке. Титр сыворотки (также указывается на этикетке) должки быть не ниже 1:32 (для сыворотки В (Ш) - не ниже 1:16/32). Под титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (Ш) -- синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма в др.).
Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(II), В(Ш), AB(IV).
Изотонический раствор хлорида натрия,
Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).
^ Техника проведения реакции
Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).
Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (Ш).


Рисунок 6.24 - Набор стандартных сывороток и тарелка


Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 8 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают. Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.
После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2 (II).
В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.
^ Трактовка результатов
Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной.
При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд на смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда и хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.
При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких зернышек (агглютинатов).
Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.


Рисунок 6.25 - Трактовка результатов


При оценке результатов определения групп крови могут быть получены следующие варианты (рис. 5.2):
^

5.3.2Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ).


Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, я также групповых антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Это дает полную серологическую характеристику крови.
Реакция со стандартными эритроцитами проводится следующим образом.
^ Необходимое оснащение ^ Техника проведения реакции

  1. Кровь для исследования берут из вены в сухую пробирку, центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для разделения на сыворотку и эритроциты.

  2. На маркированную тарелку пипеткой в шесть ячеек наносят по одной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними -по одной маленькой капле (0,01мл) стандартных эритроцитов групп 0(1), А(П), В(Ш) (по две серии).

  3. Дальнейшие мероприятия проводятся аналогично методу с использованием стандартных изогемагглютинирующих сывороток: соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего оценивают результат. Реакция со стандартными сыворотками проводится описанным выше способом параллельно с реакцией со стандартными эритроцитами.
^ Трактовка результатов

Таблица 6.6 Трактовка результатов



Наличие агглютинации при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками следующих групп

Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами следующих групп

Группа
крови

O(I)

A(II)

B(III)

AB(IV)

O(I)

A(II)

B(II)



-

-

-



-

+

+

Oαβ(I)

+

-

+



-

-

+

Aβ(II)

+

+

-



-

+

-

Bα(III)

+

+

+

-

-

-

-

ABє(IV)

Особенность трактовки результатов реакции со стандартными эритроцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольными (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специфическую реакцию агглютинации с любой сывороткой). Результат перекрестного способа считается достоверным, только если при оценке результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.
^

5.3.3Определение групп крови моноклональными антителами

Необходимое оснащение
Для определения группы крови используются моноклональные антитела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.
Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту. Разработаны стандартные реагенты - моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя лиофилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.
^ Техника проведения реакции
Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти - В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.
^

Таблица 6.7 - Схема оценки результатов определения групп крови с помощью моноклональных антител (цоликлоны анти-А и анти-В)



Наличие агглютинации при реакции с цоликлоном

Группа крови

Анти-А

Анти-В



-

-

Oαβ(I)

+

-

Aβ(II)

-

+

Bα(III)

+

+

ABє(IV)


2010-07-19 18:44 Читать похожую статью
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • Контрольная работа
  • © Помощь студентам
    Образовательные документы для студентов.